病理实验服务
病理实验服务

Pathological laboratory services

病理实验服务

透射电镜&扫描电镜

实验介绍:

透射电子显微镜(transmission electron microscope,TSE)是利用透射电子成像,因而要求样品极薄厚度不能超100nm。其结构包括三大部分:电子学系统、真空系统和电子光学系统;扫描电子显微镜 (scanning electron microscopy,SEM) 是利用聚焦的非常细的高能电子束在试样上扫描,激发出各种物理信息。通过对这些信息的接受、放大和显示成像,获得测试样表面形貌的观察。其结构由真空系统,电子束系统以及成像系统组成。  


实验流程:

透射电镜: 树脂包埋—制片—拍照 

扫描电镜:脱水-干燥-喷金-拍照


实验结果展示:

透射电镜: 

1.jpg   2.jpg   3.jpg

线粒体                                             胆固醇结晶                                     肥大细胞


扫描电镜:

4.jpg   5.jpg   6.jpg

 纳米材料                                         真菌孢子链                                     细胞


九游国际电镜送样单

下附电镜样本准备方法及要求,如因前期样本准备出现问题或未详细填写送样单中样品


姓名


单位


送样日期


电话


Email


样品内容(请选填)

1、动物组织

种属


组织具体部位


2、植物组织

种属


组织具体部位


3、细胞(贴壁或悬浮)

详细说明细胞名称或类型:

 

4、细菌(固体培养基或悬浮)

详细说明细菌名称或类型:

 

5、病毒

详细说明病毒粒径和形状(是否有致病性,是否悬浮等):

 

6、外泌体,囊泡等

详细说明样本前期处理方法(是否冷冻,是否悬浮等):

 

7、其他如纳米材料等

详细说明样本的特性:材料的粒径和形状,若带有磁性将无法实验

 

样品数量


编号(尽量简洁)


切片和定位要求(肌肉的横纵切,肾切皮质看肾小球等)


非常重要 观察或拍照具体要求,附参考图(如看自噬、凋亡、线粒体等)   


实验之前(附参考图片或说明)




下附电镜样本准备方法及要求,如因前期样本准备出现问题或未详细填写送样单中样品

内容及要求,或者实验本身存在定位或易降解等方面异常难度,导致结果图片与预期结果不符的,我司一概不接受退单。


透射电镜样本准备方法及要求


以下所有样本必须尽量新鲜,固定液或悬浮液都不得冷冻结冰!

1、动物组织样本

①1-3min内取样,取样组织米粒大小,尽量薄。(尽量保持在1-3mm³,电镜所用固定剂穿透力较弱,为了与固定液的穿透速率相适应,样品块的大小不得超过此范围,以确保固定效果)。

②由于电镜观察范围有限,要求取材时尽量精确到需要观察的目的部位,然后在同一个部位取3~5块样品(如观察肾小球取肾皮质;观察胰岛取胰岛丰富的胰尾;皮肤,肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定)。

③取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤,刀片要锋利避免挫伤组织。

④ 组织取下后立即投入电镜固定液内室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

2、植物组织样本

①取材要求同动物组织样本。

②组织投入固定液后需要进行真空抽气让组织沉底,如无条件抽气可用滤纸将组织塞进固定液内,组织不能漂浮在固定液表面。

3、细胞样本

贴壁细胞:(对细胞外形没有要求且实验目的与细胞膜无关)

培养好的细胞弃培养基,加入胰酶消化。 胰酶消化好后(时间不宜过长),加培养基终止消化,吸管轻轻吹打至细胞起浮。吸入离心管,低速离心(不超过3000转),2min左右,细胞团要有绿豆大小;弃上清,加入电镜固定液(固定液需提前恢复至室温),细胞团吹散重悬,室温避光固定30min,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

(对细胞外形有要求且实验目的与细胞膜有关)

培养好的细胞弃培养基,加入电镜固定液(固定液需提前恢复至室温),常温避光固定5min左右,用细胞刮(或软橡胶盖切得平整小方块)沿一个方向轻轻刮下细胞,切记不要反复刮,避免细胞刮破,然后用巴氏吸管把细胞液吸入离心管内,放入离心机(不超过3000转),低速离心2min左右,细胞团要有绿豆大小,弃固定液后加新的电镜固定液,细胞团吹散重悬;室温避光固定30min,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

悬浮细胞:离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀芝麻至绿豆大小,弃培养基后加电镜固定液室温避光固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

4、细菌样本

长于固体培养基的细菌:连带着培养基一起挑下细菌放于电镜固定液内室温固定2h,再转移至4℃保存, 4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

悬浮细菌孢子等:离心收集细菌要肉眼可见细菌沉淀芝麻至绿豆大小,弃培养基后加电镜固定液室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

5、病毒

破碎组织细胞,粗离心去除细胞碎片取上清,超速离心分离出病毒(病毒提取的过程需要客户自己完成)。用缓冲液(如PBS)悬浮病毒,4℃保存运输,尽快滴片做负染后及时电镜观察拍照。

6、外泌体囊泡等

客户自己完成外泌体囊泡等的提取收集,用缓冲液(如PBS)悬浮,4℃保存运输,尽快制片做负染后及时电镜观察拍照。(因此类样品极易降解,样品越新鲜越好,数小时内完成滴片负染,否则做出的效果很不理想甚至完全观察不到)

7、纳米材料等无机材料

直接准备粉剂或用缓冲液(如PBS)悬浮,常温保存运输即可。做负染后电镜观察拍照。